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咖啡豆如何让癌细胞凋亡?喝咖啡预防癌症

POST TIME: 2017-07-04 23:06

咖啡豆醇通过上调ATF3诱导结肠癌细胞凋亡,回复170620?#19978;?#36733;,一月有效
ATF3转录激活因子,activating tranion factor 3,属于含亮氨酸拉链结构的转录因子ATF/CREB家族成员,是一个应激反应诱导基因。
咖啡豆醇介导人结肠癌细胞凋亡
使用0、12.5、25和50μM的咖啡豆醇处理HCT116细胞24小时,蛋白质印迹检测断裂的PARP。用25μM处理HCT116细胞,断裂的PARP略微增加;50μM处理后显著增加(Fig.1A)。
PARP(poly ADP-ribose polymerase)是DNA修复酶,是细胞凋亡核心成员caspase切割的底物,凋亡指标。
此外,使用50μM咖啡豆醇处理SW480、LoVo、HT-29细胞系,断裂的PARP表达显著增加(Fig.1B)。
结果表明:咖啡豆醇可能诱导人结肠直肠癌细胞凋亡。

ATF3表达有助于咖啡豆醇介导的细胞凋亡
用咖啡豆醇处理HCT116细胞24小时,使用ATF3抗体进行蛋白质印迹,?#20142;?#20381;赖性地增加ATF3蛋白水平(Fig.2A);
此外,在咖啡豆醇kahweol处理的SW480、LoVo、HT-29细胞也观察到ATF3蛋白水平增加(Fig.2B);
在咖啡豆醇处理3小时后ATF3蛋白水平开始增加,24h达大值(应当再做个48h…当值持平或者下降时,挑出达到大值得小浓度?#20142;浚‵ig.2C);
ATF3功能实验:构建ATF3表达载体,咖啡豆醇处理,ATF3过表达增加了断裂的PARP水平(Fig.2D);转染siRNA敲除ATF3,减少了咖啡豆醇介导的断裂PARP水平(Fig.2E)。
这些发现表明:咖啡豆醇介导的ATF3表达可能有助于人结肠癌细胞凋亡。

咖啡豆醇介导的ATF3表达来自转录调控
咖啡豆醇诱导HCT116、SW480、LoVo、HT-29细胞中ATF3的mRNA上调(Fig.3A),这与咖啡豆醇对ATF3蛋白水平的影响相似;
采用荧光素酶实验测量ATF3启动子活性,观察到咖啡豆醇处理HCT116、SW480、LoVo、HT-29细胞后,增强了ATF3启动子活性(Fig.3B);
在咖啡豆醇处理后3小时,ATF3启动子开始活化(Fig.3C)。

CREB负责kahweol诱导的ATF3启动子激活
为确定kahweol诱导的ATF3启动子激活相关的特定位点,构建ATF3启动子萤光素酶载体(pATF3-1420/+34、pATF3-718/+34、pATF3-514/+34、pATF3-318/+34,pATF3-147/+34和pATF3-84/+34)转染到HCT116细胞中,用50μM的kahweol处理24小时;
pATF3-1420/+34和pATF3-718/+34,将ATF3启动子活性提高了7倍(Fig.4A)
使用含有-147至-84区域的ATF3启动子载体将活性提高了7倍,而没有使用-147至-85区域的载体仅仅稍微增加了ATF3启动子活性,这表明kahweol结合的相应位点/元件可能在-147到-85区域。据报道,Fushi tarazu(Ftz)和CREB是ATF3启动子中的顺式作用元件,含有-147至-85区域。为了鉴定是哪个顺式作用元件起的作用,将每个位点缺失的ATF3启动子载体转染到HCT116细胞中,并用50μM的kahweol处理。
当CREB位点缺失时,kahweol诱导的ATF3启动子活性显著降低。然而,删除Ftz位点并不影响kahweol诱导的ATF3启动子活性(Fig.4B)。
这些数据表明CREB对于kahweol诱导的ATF3表达可能是重要的。

Kahweol诱导的ATF3表达依赖于ERK1/2和GSK3β
为了阐明咖啡豆醇与ATF3表达相关的上游激酶的关系,在HCT116细胞中预处理各种激酶?#31181;?#21058;如PD98059(ERK1/2?#31181;?#21058;)、SB203580(p38?#31181;?#21058;)、SP600125(JNK?#31181;?#21058;)、LiCl(GSK3β?#31181;?#21058;)。
添加ERK1/2?#31181;?#21058;PDK18059、GSK3β的?#31181;?#21058;LiCl,显著降低了kahweol介导的ATF3表达(Fig.5A、5D);
But,其他激酶?#31181;?#21058;并不影响ATF3表达(Fig.5B、5C)。
这些数据表明:ERK1/2和GSK3β可能是kahweol介导的ATF3表达的主要上游激酶。

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